花卉植物无菌接种组培技术-- 1、外植体的选取及预处理 ⑴外植体选取 选取生长健壮、已发芽、长势较好、无病害的植物带芽的枝条作为外植体。 ⑵材料预处理 取带芽的枝条,用洗衣粉适量冲洗,然后扳取或用清洁剪刀剪取带芽部位(约1cm1cm大小),顶芽和腋芽、大芽和小芽分开。继续用洗衣粉清洗10分钟,清洗时需不停晃动。再用自来水冲洗干净,置空培养瓶备用。 2、外植体消毒 ⑴蒸馏水冲洗 外植体置于已杀菌开机的超净工作台上,新洁尔灭洗液消毒双手,用无菌蒸馏水清洗外植体2-3次,需晃动。 ⑵酒精消毒 75%酒精倒入装外植体的容器内,消毒外植体30-60s,时间长短视植物材料情况而定。动作一定迅速,需晃动。然后将酒精倒去。 ⑶升汞消毒 1%生汞倒入装外植体的容器内,消毒外植体5-10min,时间长短视情况而定。需晃动,在最后3min静置,升汞注满容器,将已灼烧的镊子放入容器升汞内浸泡。 ⑷蒸馏水清洗 用镊子将外植体取出,放入另一无菌蒸馏水瓶中清洗,反复清洗4次。 ⑸茎尖的剥离 用灼烧冷却的镊子和剪刀对外植体进行处理,剥离外植体材料芽外部小叶片,露出尖端生长点和2-3片叶原基部分,将此部分剪下做培养材料。再用无菌蒸馏水清洗3-4次。 ⑹接入培养基 培养基瓶放入工作台内,将剥离的材料分别用消毒过的镊子放入培养瓶内,盖上瓶盖,置培养篮内,写上培养时间、操作人及培养品名,入培养室培养。